一、Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒

产品信息

产品描述

动物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强、操作简易。

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA，如昆虫足翅、鼠尾、鼠趾、动物皮肤和内脏等。裂解产物可以用于DNA提取纯化、也可以直接用于PCR反应、也可以在-20℃或以下温度条件下长期保存备用。

本试剂盒中提供的2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很强的扩增兼容性，不需要额外采用纯化提取试剂去除裂解产物中的各种残骸杂质，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化扩增步骤的操作过程，降低污染几率。

该试剂盒可用于动物基因扩增检测、转基因动物基因型鉴定等。

产品组分

  a）Lysis Buffer 和Proteases两种组分配合使用于动物组织裂解；  

b）2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含PCR扩增所需要的热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和Mg²⁺等；已混有溴酚蓝染料作为电泳指示剂， PCR产物可以直接进行电泳。

运输方法：冰袋运输。

保存方法

1. 试剂10184-A【Lysis Buffer】为动物组织裂解缓冲液，在常温下，可保存12个月。

2. 试剂10184-B【Proteases】为动物组织裂解剂，使用时请勿长久开盖，建议保存于-20℃，避免反复冻融。

3. 试剂10184-C【2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)】，建议保存于-20℃，避免反复冻融。

操作方法

样品基因组DNA释放

1. 在离心管中加入200 μL Lysis Buffer，2 μL Proteases，轻轻涡旋混匀；

2. 取约10 mg动物组织，置于上述离心管中，轻轻涡旋混匀。

3. 55℃孵育5-30 min，然后95℃处理10 min。

4. 12000 rpm离心5 min。

5. 将上清转移至新的离心管，4℃或-20℃保存或直接用于PCR扩增。

【注】：a）Lysis Buffer与Proteases混合后尽快使用，不宜长期保存；大量样本操作时，可以将Lysis Buffer与Proteases按100 μL:1 μL的比例混匀备用。

b）组织应取少量并尽量剪碎，以便裂解反应更顺利进行；鼠尾组织可以取1-5 mm；皮肤内脏等可以取约一粒米大小碎块。

c）55℃孵育，一般5 min即可满足多数PCR需求，如鼠尾、鼠耳等组织；若需要的DNA量较大或样品较难裂解，可将时间延长至30 min或更久；组织块不需完全裂解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

PCR反应鉴定——PCR反应体系

【注】：各组分使用前应充分混匀。

a）模板使用量：建议1-10%总体系。避免超过总体系的20%。

b）引物终浓度：推荐使用0.2-0.25 μM。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。

c）反应体系：推荐使用20 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

e）对照反应：建议进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

PCR反应鉴定——PCR反应条件