产品内容：

提取液：液体10 mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体10 mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加蒸馏水0.6 mL充分溶解，4℃保存。

试剂三：液体1 mL×1支，4℃保存。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入试剂一0.6 mL充分溶解，4℃避光保存；

产品说明：

AAT是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。

AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇，同时还原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，测定412 nm吸光度增加速率，来计算AAT活性。

自备仪器和用品：

   可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

操作步骤：

一、 样本的前处理：

称取约0.1g样品，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g 4℃离心20min，取上清液待测。

二、 测定步骤：

1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2、 试剂一在37℃水浴保温30 min以上。

3、 样本测定

    将上述试剂按顺序加入1 mL 玻璃比色皿中，加试剂四的同时开始计时，在412nm 波长下记录10s时的初始吸光度A1 和130s后的吸光值A2，计算ΔA空= A2空-A1空；ΔA测= A2测-A1测，ΔA=ΔA测-ΔA空。

注：如果△A测偏低，可以延长反应时间，如测定10 s和310 s的吸光度，相应修改计算公式中反应时间。

三、AAT活性计算：

按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：37℃中每mL反应体系下每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。。

AAT (U/mg prot) = 1000×ΔA÷(Cpr×V样) ÷T= 5000×ΔA÷Cpr；

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

按样本鲜重计算：

单位的定义：37℃中每mL反应体系下每克组织每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。

AAT (U/g 鲜重) = 1000×ΔA÷(V样÷V样总×W) ÷T=5000×ΔA÷W

按血清浓度计算：

单位的定义：37℃中每mL反应体系下每mL血清每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。

AAT (U/mL 血清) = 1000×ΔA÷V血清÷T= 5000×ΔA。

Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL；V样：加入反应体系中上清液体积，0.1mL；W ：样品质量；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，2min；V血清：0.1mL。

注意事项：

上清液蛋白质含量需要另外测定。建议购买本公司生产的BCA蛋白质含量测定试剂盒。

当吸光值大于1时，建议稀释后测量。

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