非洲猪瘟荧光PCR检测试剂盒（荧光TaqMan qPCR法）

描述：该制品系专为 RNA 样本的 LAMP 扩增反应设计， 制品中 Bst 4.0+ Polymerase 中包含 Bst 2.0 DNA 聚合 酶、 极其耐热 ThermoStable V 反 转录酶、Rnase Inhibitor，在 RNA 的 LAMP 扩增中无需再加入任何其它 酶制品即可用于 RNA 的 LAMP 扩增。除此外，Bst4.0+ DNA Polymerase 聚合酶中不含有甘油成分，因此可用于 建立 LAMP 引物 mix 与酶制品的冻干品，以提高 LAMP 检测制品的稳定性和易用性。 Bst 4.0+ Polymerase 可搭配不同的反应 Buffer 从而 实现不同的显色与检测方式。三种Buffer均已包含dNTP、 Mg 2+和相应的反应缓冲盐。其中 2xRed LAMP BufferD 用于红黄变色反应，扩增完毕后阳性样品为黄色，阴性样 品为红色；2xSG LAMP BufferD 包含 SYBR Green 染料 用于实时荧光检测；2xLAMP BufferD 用于浊度分析、浊 度仪或搭配 OG 橙绿变色反应管（阳性样本为绿色、阴性 样本为橙黄色，A3821）。 货 号 名 称 A3825 Bst4.0+ Polymerase (250 μl) A3825-01 2xRed LAMP BufferD (1 ml) A3825-02 2xLAMP BufferD (1 ml) A3825-03 2xSG LAMP BufferD (1 ml) 注意：Bst4.0+ Polymerase：2.5μl 该制品包含 8U Bst2.0 DNA Polymerase、20U ThermoStable V反转录酶、8U Rnase Inhibitor、22%海藻糖，不含甘油，可用于冻干。 储存：长期保存于-20℃，可保存 2 年。短期保存置于 4℃， 保存 3 个月，避免反复冻融。 使用方法： 1. 配制反应体系 在 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂 2xLAMP BufferD 10 μl Bst4.0+ Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer Mix 2 μl 模板 RNA X μl ddH2O 到总体积 20 μl 10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、 LoopF/B 分别为 4 μM、F3/B3 分别为 2 μM 2. 反应体系配好后，置于 60~68°C（首次实验采用 65°C） 进行反应 20~45min。 3. 引物及酶制品的冻干（可参考） Bst4.0+ DNA Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer 2 µl 45%海藻糖 0.5 μl Total 5 μl 将该制品进行冻干处理，获得冻干品。 4. 冻干制品的 LAMP 扩增 向一份冻干品中加入 10 μl 的 2x Red LAMP BufferD 溶解冻 干制品，并加入最多 10 μl 的检测 RNA 模板(总体积为 20 μL) 进行 LAMP 扩增。 

组分
名称 100T Lyophilized TaqMan PCR Reagent 1 瓶 2×TaqMan PCR Buffer5 1 ml ASFV TaqMan PCR Assay 1 支 阳性标准品（105 copy /μl）干粉 1支
主要优势
制品为冻干品形态，任意温度储存、运输，长效保质期 试剂、引物、探针全试剂于一管，极为简洁，方便使用 试剂盒搭配的热启动Fast Taq DNA聚合酶确保了极速扩增速度，30分钟内完成检测 检测灵敏度稳定的达到5 Copy级别，提取的病料核酸样品可低至“飞克”级别，为拭孖、水、环境等样本的检测提供了可靠的方案 在确保高灵敏度的同时，极为严格的阴性控制水准，避免假阳性检出，并利于检测人员判读结果 引物探针覆盖于非洲猪瘟保守外膜蛋白P72区域，避免变异病毒的漏检 先进的LNA短引物技术，提供最为苛刻、严谨的引物探针组合，确保试剂盒的高可靠性
储存
1. Lyophilized ASFV TaqMan PCR Reagent为冻干品形式，内含热启动Fast Taq DNA聚合酶、dNTP、扩增引物、探针，每瓶可用于50头份的扩增反应。 2. Lyophilized ASFV TaqMan PCR Reagent，可置于室温保存6个月，4℃保存12个月，-20℃长期保存，并可采用室温运输。 3. 冻干制品经1×TaqMan PCR Buffer2溶解后，可于-20℃长期保存。 4. 1×TaqMan PCR Buffer2可以室温长期保存，但通常保存于4℃或-20℃。
检测能力展示
	图1：高灵敏度检测能力，低至5 Copy, 1-7分别为105、104、103、102、10、5 Copy、ddH2O	图2：猪瘟阳性病料（脾脏）提取的基因组DNA模板检测能力， 低至“飞克”级,1-7分别为2ng、0.4ng、80pg、16pg、3.2pg、640fg、ddH2O
图3：阴性控制及低Copy区分能力，可靠的区分5和10 Copy, 1：105Copy；2：10 Copy（8重复）；3：5 Copy（8重复）；4：ddH2O（8重复）

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