E-PNG01  糖基肽酶（N糖苷肽酶F）

PNG酶F适用于从糖蛋白和糖肽中释放所有类型（高甘露糖型、杂合型和复杂型）的N - 连接糖基。PNG酶F不会去除植物糖蛋白上常见的含有α(1 - 3)连接核心岩藻糖的低聚糖。

PNG酶F从糖蛋白中切割N - 连接（天冬酰胺连接）低聚糖。该酶将天冬酰胺脱氨为天冬氨酸，同时保持低聚糖的完整性。变性作用可提高切割速率。大多数天然蛋白仍能够被完全N - 去糖基化，但孵育时间必须延长。在反应条件（37°C）下，该酶至少96小时内将保持完全活性。PNG酶F不会去除植物糖蛋白上常见的含有α-(1,3)-连接核心岩藻糖的低聚糖；为此目的，请使用肽N - 糖苷酶A。

产品规格：

PNG酶F可从糖蛋白上切割N - 连接（天冬酰胺连接）寡糖。该酶将天冬酰胺脱氨为天冬氨酸，同时保持寡糖的完整性。PNG酶F不会去除植物糖蛋白上常见的含有α-(1,3)连接核心岩藻糖的寡糖；若要去除此类寡糖，请使用肽N - 糖苷酶A。

变性作用可提高切割速率。大多数天然蛋白仍能够被完全N - 去糖基化，但可能需要延长孵育时间。在反应条件（37°C）下，该酶至少96小时内将保持完全活性。

有多种替代酶可用于去除N - 糖基，尤其是内切糖苷酶F家族酶和内切糖苷酶H。这些酶在寡糖核心的两个N - 乙酰葡萄糖胺残基之间进行切割，在天冬酰胺上保留一个N - 乙酰葡萄糖胺残基，从而生成一个截短的糖分子。这会产生一种带电糖，有助于使那些在使用PNG酶F（其会完整去除寡糖）去糖基化后会沉淀的蛋白质保持在溶液中。内切糖苷酶F1可切割高甘露糖型和部分杂合型N - 糖基。内切糖苷酶F2可切割双天线型和部分高甘露糖型N - 糖基（切割速率为内切糖苷酶F1的1/40）。内切糖苷酶F3可释放三天线型和岩藻糖基化双天线型N - 糖基。内切糖苷酶H可去除杂合型或高甘露糖型糖基。

来源：伊丽莎白金菌（原属脑膜炎败血黄杆菌）

EC编号：3.5.1.52

PDB编号：1PGS

UniProt编号：Q9XBM8

其他名称：PNG酶F、肽N - 糖苷酶F、N - 糖苷酶、N - 糖基酶

E - PNG01产品包含：

PNG酶F溶于20 mM Tris - HCl缓冲液（pH 7.5）中，体积为60 µL

5倍反应缓冲液：7.5 – 250 mM磷酸钠缓冲液，pH 7.5

变性溶液：2% SDS，1 M β - 巯基乙醇

Triton X - 100溶液：15%

E - PNG01 - 200（仅含酶）产品内容：

PNG酶F溶于20 mM Tris - HCl缓冲液（pH 7.5）中，体积为200 µL

比活性：>25 U/mg

活性：5 U/mL

分子量：36,000道尔顿

pH范围：6 - 10，最适pH为7.5

操作流程：

1. 向一个Eppendorf管中加入最多200 µg的糖蛋白。用去离子水调整总体积至35 µL。

2. 加入10 µL 5倍反应缓冲液和2.5 µL变性溶液。在100°C下加热5分钟。

3. 冷却。加入2.5 µL Triton X - 100并混合均匀。

4. 向反应体系中加入2.0 µL酶，在37°C下孵育3小时。

特异性：除非核心岩藻糖为α(1 - 3)连接，否则可切割所有天冬酰胺连接的复杂型、杂合型或高甘露糖型寡糖；天冬酰胺必须在两端均为肽键连接，且无内切糖苷酶F干扰。

比活性定义：在37°C、pH 7.5条件下，催化从1微摩尔变性核糖核酸酶B上释放N - 连接寡糖所需的酶量（通过SDS - PAGE检测，切割后的核糖核酸酶B迁移速度更快）。

储存条件：4°C保存酶。

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