EZ Trans细胞转染液（24765）

EZ Trans细胞转染液产品描述：

细胞转染液（核心成分为线性聚乙烯亚胺，也称作LPEI），是新一代的转染试剂，带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团 形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。除了具有阳离子脂质体（如：Lipo2000,3000）的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点。

EZ Trans是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体。其转染性能好于树枝状聚合物，而且它的细胞毒性低。

EZ Trans细胞转染液使用方法：

瞬时转染方法

1. 接种细胞：转染前一天，用胶原酶消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、EZ Trans 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据下表所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释EZ Trans 试剂。每 1 μg DNA 需用2-5 μL EZ Trans转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的EZ Trans转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞：直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后，添加1/2体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果：在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 7h 即可检测到转入基因的表达。请自行确定最适合检测时间。„

稳定转染方法

1. 接种细胞：转染前一天，用胰酶消化细胞并计数。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，总体积如表 1 所示，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用2-5 μL EZ Trans转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的EZ Trans转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞：直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果：在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 7h 即可检测到转入基因的表达。

5.转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

EZ Trans细胞转染液运输与保存方法：

常温运输，4℃保存，保质期12个月。

EZ Trans细胞转染液使用注意事项:

质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过 260 nm 光吸收测定 DNA 浓度，260 nm / 280 nm 比值确定 DNA 纯度（比值应该在 1.8~2.0 的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者李记生物的胎牛血清培养细胞。„

EZ Trans细胞转染液特别提醒:

1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为 70~80%。

2. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。

3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是 DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。

4. 对大多数细胞来而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μLEndoFectinTM 试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 体积线性PEI转染试剂进行优化。

附：几种细胞转染方法比较

几种细胞转染方法（试剂）特点比较表